La coloration de Gram (ou méthode de Gram) est un moyen de classer les bactéries en deux grands groupes : gram-positives et gram-négatives. Le nom vient de son inventeur, Hans Christian Gram.

La méthode de Gram permet de colorer les bactéries en fonction des propriétés chimiques et physiques de leurs parois cellulaires. Tout d'abord, un colorant violet est appliqué sur les bactéries. Ce colorant tache le peptidoglycane, une couche épaisse que l'on ne trouve que chez les bactéries à Gram positif. Après la première tache, une autre tache (généralement de la safranine ou de la fuchsine) donne à toutes les bactéries gram-négatives une couleur rouge ou rose.

La coloration de Gram est presque toujours la première étape dans l'identification d'un organisme bactérien. Cependant, toutes les bactéries ne peuvent pas être classées par cette technique. Les bactéries pour lesquelles la méthode ne fonctionne pas sont appelées "variables de gramme" ou "indéterminées de gramme".

Gram a développé cette technique en travaillant avec un autre scientifique, Carl Friedländer, dans un hôpital de Berlin. Cependant, Gram a d'abord utilisé le test pour rendre les bactéries dans les poumons plus faciles à voir. Il a publié sa méthode définitive en 1884.